免疫组化如何工作?我们如何为您节省时间和金钱

诊断时必须从病人身上获取组织样本。在切除后，这个样品必须经过一个固定过程。这可以用物理或化学方法来完成。根据被研究组织的类型，通常首选特定的方法。固定很重要，因为它维持了组织结构，并确保了抗原性，即检测到的抗原的可用性。

固定的一个例子包括福尔马林固定，石蜡包埋保存标本的方法，也被称为FFPE。样品立即浸泡在甲醛中，甲醛保持组织的结构和抗原，然后脱水，这样就可以嵌入石蜡块中。

这使得极薄的切片样本更加容易，因为切片将必须安装在显微镜载玻片上进行检查。

化学修饰，如FFPE方法，会使检测组织样本中的抗原或蛋白质变得困难。抗原提取剂可以通过消除或减少化学处理的影响来帮助提高抗原表达。

通过分解福尔马林诱导的抗原交联，抗原上的表位被重新暴露以便结合。表位是抗原分子中与抗体结合的部分。抗体被用来附着在特定的靶抗原上。通过重新暴露抗原，多克隆和单克隆等一抗和二抗更容易与样本结合，有效地对靶抗原进行染色检测。

两种主要的抗原检索方法分别是热和酶检索，或热诱导表位检索(HIER)和蛋白酶诱导表位检索(PIER)。

防止抗体和试剂与用于免疫组化的样本组织的非特异性结合是至关重要的。即使抗体对靶抗原具有高度特异性，也有可能发生非特异性结合。这包括抗体吸附到不同类型的表面，与蛋白质的电荷结合，以及疏水相互作用，这些都有效地阻止了目标抗原在组织样本中的精确显示。

在标记和可视化之前，组织样品的阻断通常是最后的准备步骤。样品经过适当处理后，在阻塞缓冲液中孵育预定的时间，可以是30分钟到一夜，可以在室温环境下或在4℃的冰箱中。

可以在孵育后清洗样本，但不是必须的，因为它可能稀释初级抗体。一些常见类型的缓冲液包括传统血清，蛋白质溶液，如血清和牛血清白蛋白(BSA)，以及预先配制的商业缓冲液，含有高度纯化的单蛋白或专有的无蛋白化合物。

一旦组织样品被正确制备，染色就会发生。这可以用两种不同的方法来完成，间接化验或直接标记。间接化验，也称为间接标记，需要两个主要步骤:

1. 在你的组织样本上孵育你的第一抗体，让它与抗原结合。一旦完成，任何多余的未结合抗体可以在与标记抗体孵育前洗掉。
2. 另一个潜伏期发生，任何多余的未结合的二抗都可以被洗掉，与一抗相关的标签被量化。

这种方法由于使用了二抗，被认为更敏感，但需要更多的时间，而且所涉及的洗涤步骤可能会影响染色的扩增。直接标记比间接标记更快，因为它只需要一个抗体进行染色。这种方法涉及到目标抗原与标记的一抗直接反应，不需要多次孵育和洗涤步骤。

直接标记虽然简单、快速，但与间接标记相比，直接标记的灵敏度要低得多，产生的信号放大也要低得多。

IHC染色作为诊断工具已经有一段时间了，但最近才开始自动化。为了减少许多组织学和医学实验室对效率的负面影响，涉及免疫组化染色的费力的手工准备工作正在被自动化所取代。

当面临人员短缺时，几个步骤的自动化使得实验室技术员的工作越来越容易管理，并减少了对免疫组化强化培训的要求，有效地将工作量分散到更多的可用人员之间。