流式细胞仪如何工作&我们如何节省您的时间和金钱

分析仪内的流体系统通过激光光束的路径对准并输送流体中的颗粒，以进行识别。当将溶液中的样本注入仪器时，单个细胞随机分布在三维空间中。对于准确的数据收集，重要的是每个特定的细胞通过自己的激光束，每个细胞通过单个文件。

大多数流式细胞仪都是通过将样品注入到流动腔内快速流动的鞘状液流中，以及附加的流动细胞来实现的。鞘层流体的流动加速了颗粒，并将它们限制在样本核心的中心，这样就形成了单一的粒状流。这个过程被称为流体动力聚焦。

在流体动力学聚焦后，每个粒子通过一个或多个光束。激光的激发使结合在细胞或颗粒上的荧光试剂发出光，根据其特定的波长范围进行检测。光散射，通过一个前向散射通道(FSC)或荧光发射提供关于粒子属性的信息，和细胞粒度或内部结构的复杂性通过一个侧面散射通道(SSC)提供。

当使用荧光染料的组合时，试剂应该有不同的发射光谱。例如，MACSQuant仪器将使用各种二色镜和光学滤光片，将特定波长的光引导到相应的荧光探测器。这种排列形成了“荧光通道”。各种各样的滤光片用来控制进入荧光通道的波长。根据其光学特性，这些滤波器被称为长通、短通和带通。

• 长传球:阻挡一定波长的光。
• 短路:将光传输到一定波长。
• 带通:在规定的波长范围内传输光。

不同波长的荧光测量可以提供荧光标记的细胞表面受体或细胞内分子(如DNA和细胞因子)的定量和定性数据。氩离子激光器是最常用的流式细胞术。这是因为它发出的488nm光激发了不止一个荧光色素，而激光和弧光灯是现代流式细胞术中最受欢迎的光源。

一旦细胞或粒子通过激光，发射的侧面散射和荧光信号被转移到光电倍增管(pts)和硅光电二极管收集向前散射信号。

所有的信号都通过一个由镜子和光学滤波器组成的系统传输到它们的光电探测器。光学滤光片通过阻挡某些波长和透射其他波长来控制检测的特异性。

为了使收集到的数据可视化，用不同的方法绘制了每个测量的光学参数的值。所使用的绘图可以是单变量或双变量。在流式细胞术中，单变量图用直方图表示，而双变量图用点图表示。

单变量图(直方图)根据事件数可视化一个光学参数，例如荧光或光散射。对于每个事件，每个测量参数的信号强度值存储在一个数据文件中，随着事件的积累，会生成一条曲线，以说明事件根据各自的信号强度的分布。

另一方面，双变量图(点图)允许在单个图上同时显示两个光学参数。随着越来越多的事件被绘制出来，那些具有相似强度值的事件聚集在一起。这些簇通常可以代表特定的细胞群。

大多数细胞分选仪器可以利用从几微升到数百微升的样品体积。如果你有少量珍贵的细胞，可以考虑使用基于微流体的流式细胞仪芯片。

微流控芯片实验室(LOC)技术的发展是细胞检测技术发展中最具创新性和成本效益的方法之一。

自动将样品导入分析仪，可以进行随走随走的细胞活力分析，以及其他分析实验。自动化的添加还允许使用多种格式，从单试管到多孔板，分析更多的样品。

单管通常包含在矩形网格安排或旋转格式，以匹配用于样品制备的实验室设备。

免疫表型只是流式细胞术的众多用途之一，尽管它可能是最常见的。它被用于识别细胞上的标记，特别是免疫系统，并允许研究人员和科学家研究细胞表达的蛋白质。

细胞识别是基于存在于细胞表面的标记物或抗原、核酸酶或细胞质，并使用检测每个细胞标记物的抗体来帮助识别细胞谱系(因此有“免疫”前缀)。

免疫表型可以像使用单一标记物识别细胞那样简单，也可以像在一个面板中应用归巢剖面、激活状态和细胞因子释放那样复杂。因此，实验方案通常结合细胞表面和细胞内染色。免疫分型通常用于基础研究以及诊断疾病或监测和评估残留疾病的临床应用。

免疫表型的一些例子包括区分急性髓系白血病和淋巴细胞白血病，以及B细胞和T细胞淋巴肿瘤，其中包括慢性淋巴细胞白血病和淋巴瘤。该方法也用于淋巴细胞的反应性和肿瘤性扩张，预测淋巴瘤的预后，并用于识别淋巴细胞亚群。