离子色谱系统:

离子色谱系统

离子色谱法如何工作,我们如何节省您的时间和金钱

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色谱系统图

离子色谱(IC),也通常被称为离子交换色谱(IEX),是一种在材料中使用离子交换分离离子和极性分子的分析过程。

它是高效液相色谱(HPLC)的改进版本,基于相反电荷之间的吸引现象。换句话说,这是基于异性相吸的理论!

该方法结合色谱和离子平衡理论为一个技术,以分离离子物种。它通常用于生物分子纯化,目前在实验室中使用了几种专门的模式。科学家和研究人员依赖于离子色谱在所有阶段和纯化水平的有用性,它的浓缩和可控能力,以及它的高选择性、容量和回收率。

此外,它还可以观察氟化物、氯化物、硝酸盐、亚硝酸盐、硫酸盐等主要阴离子,以及锂、钠、铵、钾、钙、镁等主要阳离子。然而,这种色谱方法必须在距离蛋白质等电点(pl)一个单位的环境中进行。

离子交换色谱法的原理是如下

含有带电分子的粗样品被用作液相。当它通过色谱柱时,分子结合到固定相中电荷相反的位置。以电荷为基础分离的分子用不同离子强度的溶液洗脱。通过这样的溶液通过色谱柱,根据不同的电荷发生高度选择性的分子分离。”

固定相通常是一种聚合树脂。它具有特定的电荷吸引带相反电荷的样本分子。这个相也被称为离子交换器。离子交换器可以是两种类型,阳离子交换器或阴离子交换器。阳离子交换器带负电荷,吸引带正电的阳离子,而阴离子交换器带正电,吸引带负电的阴离子。

流动相或洗脱液是一种典型的溶液——一种溶解在合适溶剂中的无机盐——它将需要分离的离子引入系统。水溶液酸和碱溶液,以及有机,非水溶液也可以用作流动相。该溶液作为流动相的载体部分,并携带分析物通过离子色谱仪。

今天在实验室中进行了许多离子色谱分析,其中一些包括氨、氰化物、过渡金属和药物分析。然而,尽管每种方法的用途不同,离子色谱仪器由几个标准组件组成,与高效液相色谱类似:泵送系统、色谱柱和检测系统。

离子色谱方法和组分

伸出的手的侧面轮廓,在食指上保持三个圆圈的平衡

离子交换(IEX)
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IEX是离子色谱法的同义词,也被称为高压离子色谱法(HPIC),如前所述,是一种液相色谱法,可以划分离子物种,以便测量它们的浓度。为了扩展上面的定义,我们将进一步详细介绍IEX的基础知识。

将材料所在的溶液放入色谱柱中,离子被分离和吸收。电子分子的大小和类型将决定它们如何分离。

被特定树脂吸引较少的离子,或使用的固定相,将在色谱柱中移动得更快,并首先被过滤出来或洗脱,而更容易被树脂吸引的离子将移动得更慢,随后被洗脱。一旦它们离开色谱柱,就会对结果进行分析,并将数据绘制在色谱读数仪上。在离子交换色谱中,有两种色谱方法:阴离子交换和阳离子交换。

在离子交换色谱中,有两种色谱方法,需要不同的色谱柱:阴离子交换和阳离子交换。(IEX使用不同的离子交换树脂,这取决于被分离的材料。)

阴离子交换(AIEC):

对于阴离子交换色谱,使用阴离子交换柱和树脂,两者都有正电荷基团,如二乙基氨基乙基,或DEAE,并能够过滤出更多带负电荷的分子。这是通过在树脂上涂上带正电的反离子来实现的,它会吸引溶液中的负电离子。

用更专业的化学术语来说,这意味着pI小于色谱的pH值。这种技术通常用于净化pH值较高的带负电荷的酸性物质,如氨基酸、蛋白质、糖和碳水化合物。

阳离子交换(CIEC):

这种技术被称为阳离子交换色谱法,用于观察带正电荷的分子。这个正电荷是由于色谱中pI大于pH的事实。

与AIEC类似,CIEC使用带有负电荷的阳离子交换柱和树脂来吸引带正电荷的离子。这种技术用于测量正电荷的浓度,如钾钠、钙和镁。


离子排斥(IEC)
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离子排除色谱法是一种分离弱无机酸和有机酸的有效方法。该方法依靠阳离子或阴离子电荷交换树脂从弱离子或中性溶质分离离子溶质。

与离子交换不同,在离子排斥中,具有部分电荷的离子与所使用的带电荷的树脂类似,被分离出来。这意味着如果使用阳离子交换树脂,部分带负电荷的离子被分开。这是通过创造一种Donna膜来吸引较小的,类似的带电粒子,这意味着它们比较大的带电粒子更晚被洗脱。由于这种方法的尺寸依赖因素,它也被称为尺寸排除色谱。


抑制性和非抑制性
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抑制离子色谱法利用抑制剂来降低背景电导率和增强阴离子电导率。它可以与通用检测器一起使用,作为脱盐装置,从而消除了洗脱液中离子盐的存在所产生的干扰。在此方法中使用碳酸钠水溶液。抑制器去除洗脱液中的钠离子,将碳酸钠转变为碳酸(导电性较低)。这降低了背景电导率水平。

此外,抑制剂将钠离子(阳离子)转变为导电性更高的氢离子。这增加了峰值响应,并允许对阴离子进行高度敏感的分析。

非抑制离子色谱法不使用抑制剂。相反,它依赖于电导检测器和色谱柱。虽然设计简单,但该方法产生较高的背景电导率和较低的灵敏度。此外,可用的洗脱液仅限于邻苯二甲酸等低导电性溶剂。



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泵是这台仪器的重要部件。它用于通过样品进样器、色谱柱和检测器提供恒定的洗脱液流量。离子交换色谱中使用的流速是由泵控制的,这一点特别重要。

使用的泵类型有很多种,其中一些包括:恒流量泵,包括两种类型,往复柱塞泵或正排量泵,以及双柱塞泵,减少泵下游的脉动。


样品注入器
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样品注射可能有许多不同的方法,其中最简单的是注射阀。阀门有两个位置:加载和注入。当处于加载位置时,注射器可以填充所需的确切样品体积。这是在洗脱液经过注入器进入色谱柱时完成的。当进样器阀门转到“进样”时,洗脱液将通过进样器并携带样品进入色谱柱。

更先进的仪器通常具有自动进样器或微处理器,其中样品被自动引入色谱柱。



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在IEX中,列使用了几种不同的材料。一般来说,这些材料包括不锈钢、钛、玻璃或惰性塑料。毛细管柱也越来越普遍,特别是在高压离子色谱中。这些是由熔融二氧化硅玻璃制成的。

色谱柱的直径可以根据它是否用于正常的分析目的、高速分析、制备工作或微量分析而变化。

色谱柱既可以用于阴离子交换,也可以用于阳离子交换,这取决于材料是阴离子还是阳离子。当使用阴离子交换柱时,填料带正电荷,因此保留带负电荷的分子。当使用阳离子交换柱时,柱内的介质带负电,结合带正电的分子。


抑制器
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如前所述,抑制器降低了用于从离子交换柱洗脱样品的化学品的背景电导率。这提高了被测离子的电导率测量。

一般来说,IEX抑制器是基于膜的装置,旨在将离子洗脱液转化为水,以提高灵敏度。它可以与通用检测器一起使用,作为脱盐装置,去除洗脱液中离子盐的存在所产生的干扰。

然而,这些设备通常与纯水洗脱剂一起使用。因此,确定该装置是否可以与水或有机洗脱液一起使用是很重要的。


探测器
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样品离子分离后,需要对它们进行识别和定量。这将通过使用一个检测器来完成,该检测器将在列的末尾分析输出。通过这样做,每次分析物分子从色谱柱中出现时,检测器将产生一个可测量的信号,该信号在色谱图上打印出一个峰值。

最常用的设备是电导率检测器。另一种常用的设备包括电化学检测器,它是流量和体积优化的,用于毛细管和分析离子色谱的高性能安培检测,并提供低背景。

其他可用的探测器包括光电二极管阵列探测器,多波长UV/Vis探测器和质谱仪。


美国宇航局的离子色谱芯片
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在寻找地球以外的生命时,我们寻找的最重要的标志是水的存在。碳基生命离不开水,所以探测其他行星或天体上的水是确定那里是否存在生命的第一步。

美国宇航局一直在开发一系列仪器和测试,以便在太空中确定行星上是否存在水。离子色谱法是这些重要的测试之一。他们正致力于开发一种离子色谱芯片,这种芯片既轻便又有效,可用于水分析和脱盐。


离子交换色谱租约,以满足每一个需要

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离子色谱仪制造商和型号
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瑞士万通:
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ThermoFisher科学:
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日东精工分析:
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