快速蛋白质液相色谱和租赁如何为您节省时间和金钱

FPLC系统由以下特点组成:

• 程序控制器:它控制系统的许多方面，从分离参数到数据收集。
• 泵:在液相色谱过程中，通常会看到两个泵用于控制每种缓冲液的量。这通常是柱塞泵的一种。偶尔也会使用单泵，将缓冲液从各自的储液池中抽到与混合室相连的比例阀中。
• 注入阀:该阀将样品回路和混合器连接到色谱柱。该阀能够将样品装入注入回路，注入回路将样品注入色谱柱。
• 注射回路:在样品溶液注入色谱柱之前，该管被填充。
• 色谱柱:色谱柱由玻璃或塑料制成，比一般HPLC所用的色谱柱长，但由于FPLC所用的样品较大，其内径较大。色谱柱用树脂和缓冲溶液填充，在一端有一个小开口来保留珠子，同时让溶解的蛋白质和缓冲液通过。
• 流式细胞:洗脱液通过一个或多个流式细胞，利用紫外线测量洗脱液中的蛋白质浓度，利用电导率测量盐浓度，甚至测量ph值水平。这些监视器允许检测单独存在于洗脱液中的蛋白质。
• 组分收集器:该组分由小容器(如试管)组成，根据蛋白质峰值浓度以固定体积或特定组分收集洗脱液。
• 显示器:显示器或记录器由一台计算机和一个显示器接口组成。它能识别并记录生物分子浓度的存在。

这种方法根据分子的特定电荷来分离分子，这取决于pH值或缓冲液。如果一种蛋白质的电荷较多，它就更有可能与电荷相反的树脂结合。根据盐浓度的不同，蛋白质从树脂中洗脱的时间会变短或变长，因为盐离子会与树脂分子竞争，使其粘附在树脂上。

使用与固定相连接的衬底，根据所使用衬底的亲和性，样品通过并结合到固体衬底上。没有结合的化合物然后用水溶液冲洗掉。然后使用具有一定pH值或盐浓度的溶剂将与底物结合的剩余化合物洗脱。

这种方法也称为凝胶过滤色谱法。一种凝胶介质，由特定大小的珠子组成，在混合物通过时将其分离。较大的分子无法通过，被从色谱柱中洗脱，而较小的分子则扩散到凝胶介质中并固定在原地。这导致了基于尺寸和分子量的分离，因为洗脱是按照线性重量的顺序发生的。